Avaliação da ação do Zika Vírus em linhagem celular de glioblastoma

Abstract

Introdução: O Glioblastoma é o tumor cerebral mais comum em adultos e, apesar dos tratamentos disponíveis, permanece um dos mais letais e de difícil tratamento, sendo que a maioria dos pacientes morre em dois anos. Novos tratamentos são necessários e, neste contexto, a terapia viral tem sido estudada. A infecção por Zika vírus (ZIKV), tem demonstrado, em estudos iniciais, que o vírus causa inibição de proliferação celular, bem como indução de apoptose e parece ter predileção por células neuronais em desenvolvimento. Objetivo: Avaliar os efeitos da infecção por ZIKV em linhagem celular de glioblastoma. Material e Métodos: Duas linhagens de glioblastoma (U138 e U 251), foram infectadas com ZIKV em três diferentes diluições (1:100, 1: 1000, 1: 10000). Foram realizados testes para avaliar a viabilidade celular por MTT, migração celular, adesão celular, apoptose (Caspase 3/7), níveis de interleucinas e marcadores celulares (CD14 e CD73). Todos os resultados foram comparados com controles. Resultados: Nosso estudo demonstrou uma redução significativa (p<0,005) na capacidade de invasão celular nos três tempos analisados, com a diluição de 1:100 de ZIKV. Também ocorreu um aumento na adesão celular nas três diluições estudadas, bem como um aumento nas taxas de apoptose. Não houve alteração de migração celular e na viabilidade celular comparado com os controles. Também foi observado um aumento de expressão de CD14 e CD73. Conclusões: Nossos resultados sugerem que ZIKV pode estar associada com aumento de expressão de CD73, aumentando a adesão e a infiltração celular, bem como aumentando as taxas de apoptose. Investigações adicionais são necessárias para explorar o potencial de uso de ZIKV no tratamento do glioblastoma.

Introduction: Glioblastoma (GBM) is the most common central nervous system (CNS) tumor. Despite available therapies survival remains poor, and new treatment strategies are needed. Oncolytic viral therapy is under investigation in GBM. Zika virus (ZikV) infection has demonstrated inhibition of neuronal precursor cells proliferation in preclinical studies. Objective: Evaluate the effects of ZikV infection on human glioblastoma cell lines. Material and Methods: Two GBM cell lines (U138 and U251) were infected by 2 hours with ZIKV using the titer of PFU/ml diluted in 1:100, 1:1000, 1: 10000. Cell. We performed tests to evaluate cell viability by MTT and protease active assay, cell migration trough a wound healing assay and cell infiltration using insert culture method. Also, the cell lines were tested by cell adhesion capacity, apoptosis (Caspase 3/7), interleukins levels and cell surface markers for CD 14 and CD73.These results were compared to controls. Results: Our study has demonstrated a reduction in cell viability in U138 lineage trough MTT assay. In the U251 lineage and in the others tests for cytotoxicity/viability, ZIKV did not altered cell viability neither cell migration compared to controls. We showed that ZIKV caused reduction in cell invasion and resulted in increased rates of apoptosis in both cell lines. We observed that infection of ZIKV caused increased rates of cell adhesion and CD73 marker. Conclusions: These findings suggest that ZIKV infection may be associated with increased CD 73 Expression thus increasing cell adhesion and cell infiltration. The ZIKV may be cause an increase rates of apoptosis and influencing cell cytotoxicity and viability. Further investigations to explore the role of ZIKV in GBM treatment are warranted.